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超純水在PCR檢測中的作用
作者:admin 發布日期:2020/6/1 關注次數: 二維碼分享

超純水在PCR檢測中的作用

今天帶大家走入核酸檢測的常用方法PCR方法,以及如何在PCR檢測過程中降低檢測結果假陰性概率。

 

一、什么是PCR技術?

PCR技術又稱為聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。

在新冠病毒檢測中,核酸檢測被定義為臨床診斷的金標準,RT-PCR技術被反復提到,它是一種將RNA反轉錄和PCR相結合的技術。首先在反轉錄酶.的作用下,將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下不斷擴增(變性-退火-延伸多個循環)合成目的片段并進行分析。

二、PCR用水

PCR技術目前多搭配試劑盒使用,也有用戶自行制備反應體系,無論哪個過程都需要使用水。無論是近年來季節性爆發的甲流乙流,還是目前全球都在經歷的新冠病毒,在檢測過程中都涉及一個痛點,那就是如何盡可能提高核酸檢測的準確性,減少假.陰性結果出現的可能性。

我們首先分析一下假陰性結果出現的原因,以新冠病毒核酸檢測為例,假陰性的主要原因有:

1病人病程:不同病程,患者體內病毒載量不同;

2采樣部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同;

3采樣準確性:拭子質量,工作人員操作等;

4試劑盒的質量:引物設計以及水質控制。

為了順利將提取到的RNA反轉錄并實現DNA的成功擴增,必須抑制核糖核酸酶(RNases)的降解作用,如果試劑盒用水內含RNases,將極有可能導致假陰性結果的出現。

三、去除RNases的主要方法

1高壓滅菌:即便是在180°C下高壓滅菌4h之后,RNases仍保持某些活性,且某些細菌失活會釋放更多的RNases;

2 DEPC(二乙基焦碳酸酯處理法) :利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 處理方法使酶失活是用來抑制水溶液中RNases活性的常見方法。然而,二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物,處理須小心;同時該方法雖然能夠使酶永久失活,卻無法將其從水中去除,同時清除多余的DEPC過程中,會產生乙醇,二氧化碳等其他污染物;

3超濾法:超濾是一種真正能夠從水溶液中清除RNases的方法。

四、卓越超濾膜介紹

超濾膜被大量用于水處理工程。超濾技術反滲透預處理、飲用水處理、中水回用等領域發揮著越來越重要的作用。超濾技術在酒類和飲料的除菌與除濁,藥品的除熱原以及食品及制藥物濃縮過程中均起到關鍵作用。

超濾過濾孔徑和截留分子量的范圍一直以來定義較為模糊,一般認為超濾膜的過濾孔徑為0.001-0.1微米,截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)為1,000-1,000,000 Dalton。嚴格意義上來說超濾膜的過濾孔徑為0.001-0.01微米,截留分子量為1,000-300,000 Dalton。若過濾孔徑大于0.01微米,或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就應該定義為微濾膜或精濾膜。

一般用于水處理的超濾膜標稱截留分子量為30,000-300,000 Dalton,而截留分子量為6,000-30,000 Dalton 的超濾膜大多用于物料的分離、濃縮、除菌和除熱源等領域。

五、卓越超純水機推薦

ZYPTF落地式+壓力桶 +軟水器)

產品說明:

ZYPFT系列超級微量型超純水器是新一代秉承“人性化設計、高定位標準”研發生產的高端超純水機,將城市自來水純化為符合國標GB/T6682-2008的實驗室一級和三級超高純度實驗室用水,基于PLC全自動控制及ARM系列單片機和觸摸屏技術的人機界面,實現圖形顯示制水流程,流量監控耗材更換功能,定時定質取水功能,歷史數據查詢功能等多項技術,專業適用于科研分析等高要求實驗項目。

技術指標:

機型

I

II

C

臺上式(T

ZYPFT-I-10/20T

ZYPFT-II-10/20T

ZYPFT-C-10/20T

落地式(L

ZYPFT-I-20/40/60/100L

ZYPFT-II-20/40/60/100L

ZYPFT-C-20/40/60/100L

進水水源

總溶解性固形物含量TDS200ppm,水壓1.0-5.0kg/cm2  工作最佳水溫25

制水量

10/20/40/60/100/小時

出水流速

1.5-2.0/分鐘(水箱儲水時)

RO出水水質μS/cm

電導率<5μS/cm(在線監測),污染物去除率99.5%

UP出水水質MΩ.cm

電阻率18 .25MΩ.cm(在線監測)

微顆粒物0.1um1/ml、微生物<0.1cfu/ml、重金屬離子<0.1ppb、可溶性硅(以sio2計)<0.01mg/L

吸光度(254nm,1cm光程:≤0.001   可氧化物質[以(0)計,㎎/L]: 0.08

陽離子含量≤0.1ppb (鐵(Fe)0.005ppb ,銅(Cu)0.005ppb ,鉀(K)<0.02 ppb,鋁(Al)0.005ppb,鋅(Zn)<0.02ppb , 鉻(Cr)<0.005ppb , (Na)0.01ppb;

陰離子含量0.1ppb(氯(Cl)0.01ppb, 亞硝酸根(NO)0.02ppb, 硝酸根(NO)0.02ppb, 硫酸根(SO)0.01ppb);

選型配置

 觸摸屏+MF終端微濾+UV紫外燈

   觸摸屏+MF+UV+UF超濾

 雙顯表+MF終端微濾+UV紫外燈

總有機碳TOC

     TOC)<3ppb  

TOC)<3ppb    

        TOC)<3ppb  

熱源(內毒素)

---------------

           0.001EU/ml

         ---------------

  

ZYPTF臺上式+無菌水箱)

此文關鍵字: 超純水  實驗室超純水  超純水機   
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